長時間 細胞に滞留する

HeLa 細胞をHBSS にて洗浄後、各MitoBright LT または既存試薬にて染色し、血清入り培地に入れ替え、4 日間培養後ミトコンドリアを観察しました。その結果、既存試薬は蛍光強度が4 日後に大きく低下したのに対し、 MitoBright LT は蛍光強度が維持され、ミトコンドリアを明瞭に観察できました。さらに継続して培養を行った結果、 MitoBright LT は7 日後もミトコンドリアに滞留していることが確認されました。

使用回数の目安

*100 nmol/L MitoBright LT working solutionを調製した場合。 

血清入りの培地で染色できる

MitoBright LT と既存試薬にて、血清有無の培地で染色しました。既存試薬は血清入り培地で染色した場合、蛍光が暗くなるのに対し、MitoBright LT は血清入り培地中で染色しても蛍光強度が低下することがなく、ミトコンドリアを明瞭に染色しました。

マイトファジーのリアルタイム観察

フローサイトメーターでの検出

• MitoBright LT Green Ex: 488 nm Em: 515 nm–545 nm

• MitoBright LT Red Ex: 488 nm Em: 515 nm–545 nm

• MitoBright LT Deep Red Ex: 633 nm Em: 650 nm–670 nm

Jurkat 細胞(3.2 x 10⁵ cells/mL) をRPMI 培地 (10% fetal bovine serum, 1% penicillin-streptomycin) で 5 cm ディッシュに播種し、37℃、5% CO₂ インキュベーター内で一晩培養した。
培地を取り除き、MitoBright LT working solution (0.1 μmol/L, 5 mL) を添加し37℃ で30 分間インキュベートした。溶液を取り除き、5 mL のRPMI 培地を用いて2 回洗浄した。
RPMI 培地を添加し、細胞培養を継続し、その細胞を2 日毎にフローサイトメーターで解析した。

コラーゲンコートプレートを用いたミトコンドリア検出

ミトコンドリアの形態評価は高倍率で観察するため、コラーゲンコートしたガラスプレートがよく使用されます。
既存のミトコンドリア染色試薬は、コラーゲンに吸着しバックグラウンドを上昇させる問題がありましたが、MitoBright LTシリーズはバックグラウンドの影響がなく鮮明にミトコンドリアを染色できます。

MitoBright LT Green	既存試薬（T社）
	スケールバー: 50 μm

＜染色条件＞
HeLa細胞をコラーゲンコートプレートに播種し、24時間培養後　上澄みを抜き取り、HBSS にて洗浄した。
100 nmol/L MitoBright LT Green working solution を添加し、30分インキュベート後上澄みを抜き取り、HBSS にて洗浄し蛍光顕微鏡で観察した。

＜観察条件＞
Ex 488 nm,   Em 500-560 nm

＜結果＞
既存試薬はバックグラウンドが見られましたが、MitoBright LTで染色したミトコンドリアはバックグラウンドの影響がなく、鮮明にミトコンドリアを染色しました。

ラインナップと各試薬の蛍光特性

• MitoBright LT Green 励起波長(λex) ： 493 nm 蛍光波長(λem) ： 508 nm

• MitoBright LT Red 励起波長(λex) ： 548 nm 蛍光波長(λem) ： 564 nm/a>

• MitoBright LT Deep Red 励起波長(λex) ： 644 nm 蛍光波長(λem) ： 666 nm