02 酸化ストレス関連試薬

Liperfluo

Liperfluo

過酸化脂質検出蛍光試薬

  • 製品コード
    L248  Liperfluo
  • CAS番号
    1448846-35-2
  • 化学名
    N-(4-Diphenylphosphinophenyl)-N'-(3,6,9,12-tetraoxatridecyl)perylene-3,4,9,10-tetracarboxydiimide
  • 分子式・分子量
    C51H41N2O8P=840.85
容 量 本体価格
1 set (50 μg x5) ¥21,200

<使用回数の目安> 50 µgあたり、5-50回(保存不可)

性質

Liperfluo は、Spy-LHP の類似化合物で、過酸化脂質検出用の試薬であり、過酸化脂質で特異的に酸化されエタノール等の有機溶媒中で強い蛍光を発します(図1,2)。Liperfluo 酸化体の励起波長および蛍光波長はそれぞれ524 nm、535 nm で、測定試料への光によるダメージや試料由来の自家蛍光の影響を軽減できます。本試薬は、ジイソキノリン環の片方にテトラエチレングリコール基が導入されたもので、Spy-LHP よりも水系バッファー中での分散性が向上しています。Liperfluo 酸化体は水中ではほとんど蛍光を発しないが、細胞膜等の脂溶性の高い部位では蛍光性となることから、容易に蛍光顕微鏡による生細胞の過酸化脂質のイメージングやフローサイトメトリーによる細胞の過酸化脂質量の分析に使用することができます。

特長 
1) 細胞の過酸化脂質のイメージングや検出ができる
2) 長波長励起のため、細胞への光ダメ―ジや自家蛍光の影響を軽減できる
3) 過酸化脂質特異性が高い

技術情報

図1 過酸化脂質によるLiperfluoの励起および蛍光スペクトル変化(エタノール溶媒中)

図2  Liperfluoの活性酸素種に対する反応選択性

操作手順
・使用細胞:SH-SY5Y
 6 well Plateに播種(60x105 cell/well)
 ↓終夜(37℃, CO2インキュベート)
・LjperfluoのDMSO溶液を添加(終濃度:20 μmol/l)
 ↓15min (37℃, CO2インキュベート)
・Cumene添加(終濃度:100 μmol/l)
 ↓2h (37℃, CO2インキュベート)
・蛍光顕微鏡で測定
 装置:Olympus IX-71 epifluorescent microscope)
 ミラーユニット:U-MNIBA3
 露光時間:10 sec.
 lSO感度:800

図3 SH-SY5Y 細胞における各種薬剤刺激による過酸化脂質イメージング
   薬剤による酸化ストレス刺激により明確な蛍光増加が確認できる。
  Control、 Cumene それぞれの蛍光及び明視野画像。

操作手順
・使用細胞:L929細胞(マウス繊維芽細胞由来培養細胞株)
 35 mmガラスボトムディッシュに播種(2.5x105 cell/well)
 ↓一昼夜培養(37℃, CO2インキュベート)
・培地除去後、Liperfluoを含む新しい培地を添加(終濃度:1 μmol/l)
 ↓30 min(37℃, CO2インキュベート)
・培地除去後、t-BHPを含む新しい培地を添加(終濃度:250 μmol/l)
 ↓2 h(37℃, CO2インキュベート)
・共焦点レーザー顕微鏡にて観察
  装置:Zeiss LSM510META
  フィルターセット:FITC(GFP, Alexa488)wide filter
           HFT UV/488
           NFT490
           BP505-550

フェロトーシス研究での評価例

細胞死メカニズムの一つとして注目を集めるフェロトーシス研究においてLiperfluo が使われています。

<Liperfluo を用いた論文>

サンプル(フェロトーシス誘導法) 論文情報タイトル
ヒト気管支上皮細胞
(RSL3 及び菌培養上清の添加)
Pseudomonas aeruginosa utilizes host polyunsaturated phosphatidylethanolamines to trigger theft-ferroptosis in bronchial epithelium.
マウス繊維芽細胞
(RSL3 の添加)
Oxidized arachidonic and adrenic PE s navigate cells to ferroptosis.
HeLa 細胞
(Erastin 又はBrefeldin A の添加)
Golgi stress mediates redox imbalance and ferroptosis in human cells.

溶解例

0.8 mg /1 ml ジメチルスルホキシド

参考文献

参考文献を表示する

Liperfluoが使用された細胞種別の参考文献(細胞名:英数順)

文献No. 対象サンプル 測定機器 引用(リンク)
1 3T3-L1 adipocytes Microscope Osteocalcin triggers Fas/FasL-mediated necroptosis in adipocytes via activation of p300
2 4T1 Microscope Boosting the Ferroptotic Antitumor Efficacy via Site-Specific Amplification of Tailored Lipid Peroxidation
3 4T1, HT1080 Microscope WO3/Pt nanoparticles promote light-induced lipid peroxidation and lysosomal instability within tumor cells
4 B16, HT-1080 FCM CD8+ T cells regulate tumour ferroptosis during cancer immunotherapy
5 B16-F10 FCM Chemically Programmed Vaccines: Iron Catalysis in Nanoparticles Enhances Combination Immunotherapy and Immunotherapy-Promoted Tumor Ferroptosis
6 BeWo Microscope PLA2G6 guards placental trophoblasts against ferroptotic injury
7 BMDM FCM SiO2 and TiO2 nanoparticles synergistically trigger macrophage inflammatory responses
8 Brain slices from LN229TAZ(4SA) Microscope Neutrophil-induced ferroptosis promotes tumor necrosis in glioblastoma progression
9 Burkitt's Lymphoma FCM Artesunate activates the ATF4-CHOP-CHAC1 pathway and affects ferroptosis in Burkitt's Lymphoma
10 BV2 Microglial Microscope Induction of ferroptosis in response to graphene quantum dots through mitochondrial oxidative stress in microglia
11 Hacat Microscope Blue light-induced oxidative stress in live skin
12 HBE Microscope Pseudomonas aeruginosa utilizes host polyunsaturated phosphatidylethanolamines to trigger theft-ferroptosis in bronchial epithelium
13 HEI-OC1 Microscope Inhibition of ferroptosis protects House Ear Institute-Organ of Corti 1 cells and cochlear hair cells from cisplatin-induced ototoxicity
14 HEI-OC1 Microscope Liproxstatin-1 Protects Hair Cell-Like HEI-OC1 Cells and Cochlear Hair Cells against Neomycin Ototoxicity
15 HeLa Microscope Golgi stress mediates redox imbalance and ferroptosis in human cells
16 HeLa FCM Membrane Damage during Ferroptosis Is Caused by Oxidation of Phospholipids Catalyzed by the Oxidoreductases POR and CYB5R1
17 HeLa, SAS Microscope
FCM
Mitochondrial dysfunction promotes aquaporin expression that controls hydrogen peroxide permeability and ferroptosis
18 HepG2 Microscope Novel Fluorescence-Based Method To Characterize the Antioxidative Effects of Food Metabolites on Lipid Droplets in Cultured Hepatocytes
19 HL-60 Microscope Oxygenated phosphatidylethanolamine navigates phagocytosis of ferroptotic cells by interacting with TLR2
20 Horse breed stallions FCM Effects of media and promoters on different lipid peroxidation assays in stallion sperm
21 Human hair Microscope Mechanism of Cuticle Hole Development in Human Hair Due to UV-Radiation Exposure
22 MEF Microscope Oxidized arachidonic and adrenic PEs navigate cells to ferroptosis
23 Murine T cells FCM Murine T Cell Maturation Entails Protection from MBL2, but Complement Proteins Do Not Drive Clearance of Cells That Fail Maturation in the Absence of NKAP
24 NCI-ADR/Res (NAR)  Microscope Triggered ferroptotic polymer micelles for reversing multidrug resistance to chemotherapy
25 OEC-M1 Microscope Assessment of zero-valent iron-based nanotherapeutics for ferroptosis induction and resensitization strategy in cancer cells
26 PMVECs Microscope Genetic inactivation of the phospholipase A2 activity of peroxiredoxin 6 in mice protects against LPS-induced acute lung injury
27 RAW 264.7 Microscope Redox lipid reprogramming commands susceptibility of macrophages and microglia to ferroptotic death
28 RAW 264.7 FCM Nano-decocted ferrous polysulfide coordinates ferroptosis-like death in bacteria for anti-infection therapy
29 SH-SY5Y FCM New aspects of 24(S)-hydroxycholesterol in modulating neuronal cell death
30 SH-SY5Y Microscope
FCM
A novel fluorescent probe with high sensitivity and selective detection of lipid hydroperoxides in cells
31 SH-SY5Y Microscope Activation of p62-Keap1-Nrf2 Pathway Protects 6-Hydroxydopamine-Induced Ferroptosis in Dopaminergic Cells
32 THP-1 FCM Molecular hydrogen suppresses free radical-induced cell death by mitigating fatty acid peroxidation and mitochondrial dysfunction
33 THP-1 FCM Molecular hydrogen regulates gene expression by modifying the free radical chain reactiondependent generation of oxidized phospholipid mediators

よくある質問

Q

S343 Spy-LHPとの違いは何ですか?

A

DMSOへの溶解性が増し、生細胞の過酸化脂質の染色が容易になりました。
溶解例:1 mmol/l (50 µg/60 µl DMSO)

Q

蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーで観察する際、どの励起フィルター、レーザーが使用可能でしょうか?

A

蛍光顕微鏡の場合、GFPフィルター(励起:450-490 nm, 蛍光:500-545 nm)やFITCフィルター(励起:467-498 nm, 蛍光:513-556 nm)が使用可能です。

フローサイトメトリーの場合は、488nmで励起可能です。

Q

培地中のフェノールレッドや血清の影響はありますか?
また、バックグランドが高い場合や、蛍光が弱い(probeが光らない)場合に改善する点はありますか?

A

フェノールレッドや血清入り培地でも使用可能です。
ただし、バックグランドが高い場合はPBSに置換して下さい。
  
また、バックグランドが高い場合、Liperfluoが光により自然酸化されている可能性があります。
インキュベーション時もなるべく遮光するようにしてください。
(溶解後は必ずアルミ箔などで遮光してください。)

蛍光強度が弱い場合、反応時間を長くしてもバックグランドも高くなってしまうためお勧めできません。
そのため、装置の測定(蛍光観察)の条件を調整してください。
→励起光の強度を強くする。
→露光時間を長くする。

Q

浮遊細胞と付着細胞のどちらでも使用可能でしょうか?
また、固定化した細胞を染色することはできますか?

A

浮遊細胞、付着細胞、どちらでも使用可能です。
HL-60細胞(浮遊細胞)、CHO細胞・SH-SY5Y細胞(付着細胞)で実績があります。
固定化した細胞では染色することはできません。

取扱条件

規格
性状: 本品は、暗赤色結晶性粉末又は固体である。
純度(HPLC): 90.0% 以上
NMRスペクトル: 試験適合
取扱条件
1.保存方法:冷蔵,遮光, 2.窒素置換
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