リソソームのpH変化の影響を受けにくい

LysoPrime Deep Redおよび既存色素は酸性状態にあるリソソームに集積する性質がありますが、リソソーム酸性阻害剤であるBafilomycin A1(Baf. A1)で処理し、酸性から中性に変化すると既存色素はリソソームから離れるため蛍光シグナルは著しく低下します。一方 LysoPrime Deep Red はリソソームへ保持されやすいため、蛍光シグナルの低下が抑えられ、既存試薬に対して鮮明な観測結果が得られました。

＜検出条件＞
Deep Red: Ex= 633 nm, Em= 640-700 nm
Red: Ex= 561 nm, Em= 560-620 nm

リソソームへの滞留性が高い

LysoPrime Deep Redと既存色素のリソソーム滞留性をそれぞれの色素にて染色した細胞を用いて比較しました。既存色素による染色では染色後24時間後には蛍光が低下したのに対し、LysoPrime Deep Redでは蛍光輝度は維持され滞留性が高い結果が得られました。

＜検出条件＞
Deep Red: Ex= 633 nm, Em= 640-700 nm
Green: Ex= 488 nm, Em= 490-550 nm
Red: Ex= 561 nm, Em= 560-620 nm

実験例：老化誘導におけるリソソームpHと量の変化

A549細胞をDoxorubicin(DOX)処理を行い老化誘導を行った際の老化関連酸性β-ガラクトシダーゼ(SA-βGal)活性とリソソーム量・pHを解析ました。SA-βGal活性を老化細胞検出試薬 SPiDER-βGal色素 を用いて、リソソーム量とpHはそれぞれLysoPrime Deep Red とリソソームpH検出試薬 pHLys Red を用いて評価しました。蛍光イメージング観察において、いずれの項目も老化誘導による増加が確認され、同じ細胞をプレートリーダー測定を行いリソソーム量の数値でリソソームpHの蛍光輝度をノーマライズしたところ、リソソームpHはより酸性になっていることが確認できました。

＜検出条件＞
SA-βGal(緑):
Ex = 488 nm, Em = 490 – 550 nm
リソソームpH (赤):
Ex = 561 nm, Em = 560 – 620 nm
リソソーム量(紫):
Ex = 633 nm, Em = 640 – 700 nm

＜検出条件＞
SA-βGal: Ex = 525 – 535 nm, Em = 550 – 570 nm
リソソームpH: Ex = 555 – 565 nm, Em = 590 – 610 nm
リソソーム量: Ex = 645 – 655 nm, Em = 690 – 710 nm

既存試薬との比較

小社リソソーム検出色素シリーズは、既存の色素と比較し、リソソームへの特異性が高く、色素の滞留性が向上しています。