リソソームへの特異性が高い

既存色素とpHLys Redのリソソーム局在性をリソソームマーカータンパク LAMP1-GFP発現HeLa細胞を用いて比較しました。 既存色素による染色ではリソソーム以外にも分散してバックグラウンドが高くなったのに対し、pHLys Redではバックグラウンドが抑えられる結果が得られました（蛍光画像 Merged）。pHLys Redは既存色素と比較してリソソームへの局在性が高いことが判りました。

<検出条件>
Green: Ex= 488 nm, Em= 500-570 nm
Red : Ex= 561 nm, Em= 560-620 nm

リソソームへの滞留性が高い

pHLys Redと既存色素のリソソーム滞留性をそれぞれの色素にて染色した細胞を用いて比較しました。既存色素による染色では染色後24時間後には蛍光が低下したのに対し、pHLys Redでは蛍光輝度は維持され滞留性が高い結果が得られました。

＜検出条件＞
Green: Ex= 488 nm, Em= 490-550 nm
Red: Ex= 561 nm, Em= 560-620 nm

実験例：老化誘導におけるリソソームpHと量の変化

A549細胞をDoxorubicin(DOX)処理を行い老化誘導を行った際の老化関連酸性β-ガラクトシダーゼ(SA-βGal)活性とリソソーム量・pHを解析ました。SA-βGal活性を老化細胞検出試薬 SPiDER-βGal色素 を用いて、リソソーム量とpHはそれぞれ リソソーム染色色素 LysoPrime Deep Red とリソソームpH検出試薬 pHLys Red を用いて評価しました。蛍光イメージング観察において、いずれの項目も老化誘導による増加が確認され、同じ細胞をプレートリーダー測定を行いリソソーム量の数値でリソソームpHの蛍光輝度をノーマライズしたところ、リソソームpHはより酸性になっていることが確認できました。

＜検出条件＞
SA-βGal(緑):
Ex = 488 nm, Em = 490 – 550 nm
リソソームpH (赤):
Ex = 561 nm, Em = 560 – 620 nm
リソソーム量(紫):
Ex = 633 nm, Em = 640 – 700 nm

＜検出条件＞
SA-βGal: Ex = 525 – 535 nm, Em = 550 – 570 nm
リソソームpH: Ex = 555 – 565 nm, Em = 590 – 610 nm
リソソーム量: Ex = 645 – 655 nm, Em = 690 – 710 nm