①グルコース取り込み能力を高感度に測定が可能

水中で蛍光強度が低下する2-NBDGと異なる高輝度の蛍光色素を採用したことにより、グルコース取り込み能力を高輝度にて測定することができます。

＜観察条件＞
細胞：A549細胞
測定装置：蛍光顕微鏡
フィルターセット：GFP (Ex: 470 / 40 nm, Em: 525 / 50 nm)

②迅速な操作性を実現

高輝度のGlucose Uptake Probe-Greenにより、2-NBDGと同じ操作にも関わらず、 操作時間を大幅に短縮できます。

操作は前処理、染色(取り込み)、洗浄の3stepのみであり非常に簡便です。

③プレートリーダーを用いて測定可能

2-NBDGでは測定が困難なプレートリーダー測定に対応しています。
スクリーニング用途への活用が期待できます。

検出条件
Ex：488 nm, Em： 520 nm
細胞：A549細胞

④染色後の色素漏洩を低減

付属のWI Solutionを用いて細胞を洗浄することで色素の漏洩を抑制し、再現性の高いデータを取得することが可能です。

HBSSを用いて細胞を洗浄した場合

WI Solutionを用いて細胞を洗浄した場合

(スケールバー: 50 µm)

＜観察条件＞
細胞：A549細胞
測定装置：蛍光顕微鏡
フィルターセット：GFP (Ex: 470 / 40 nm, Em: 525 / 50 nm)

既存法との比較

Glucose Uptake Probe-Greenは、2-NBDGと同様に蛍光顕微鏡およびフローサイトメーターにも対応しています。
また、励起波長は2-NBDGと比べて、488 nm励起レーザーやGFP, FITCのフィルターセットに適しています。

Glucose Assay Kitとの違い

Glucose Uptake Assay Kit-GreenとGlucose Assay Kit-WST (製品コード: G264)の違い

1. Glucose Assay Kit-WSTは細胞上清のグルコース消費量を定量することができます。
    Glucose Uptake Assay Kit-Greenはグルコースの定量はできません。

2. Glucose Uptake Assay Kit-Greenは短時間のグルコース取り込み能力の差を測定することができます。
    Glucose Assay Kit-WSTは短時間のグルコース量の変化は測定することができません。

Glucose Assay Kit-WSTと本キットの違いを下記実験例を用いて説明します。
実験例：グルコース取り込み阻害剤(Cytochalasin B)にて処理したHepG2のグルコース消費量と取り込み能力の測定

実験のフローチャートと実験結果

実験例：Cytochalasin Bによるグルコース取り込み阻害

本キットを用いてグルコーストランスポーター阻害剤 Cytochalasin BによるHepG2 細胞のグルコース取り込み阻害を高感度に観察かつ数値化することができました。

蛍光顕微鏡観察

(スケールバー：50 μm)

＜測定条件＞
細胞：HepG2
使用培地：MEM （5.5 mmol/l Glucose）
培養条件：5 µmol/l Cytochalasin B / MEM （5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS）, 37℃, 24 hr
染色条件：Glucose Uptake Probe (500倍希釈)/DMEM （0 mol/l Glucose）, 37℃, 15 min
検出装置：蛍光顕微鏡 フィルターセット：GFP （Ex: 470 / 40 nm, Em: 525 / 50 nm）
 

プレートリーダー検出

＜検出条件＞
Ex：488 nm, Em： 520 nm

実験例：インスリンによるグルコース取り込み促進

本キットを用いてインスリンによる脂肪細胞(adipocyte)のグルコース取り込み測定を高感度に観察することができました。

蛍光顕微鏡観察

(スケールバー：50 µm)

＜測定条件＞
細胞: mouse adipocyte
使用培地：DMEM (5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS)
刺激条件：0 or 1 µmol/l Insulin / DMEM (0 mmol/l Glucose , serum free), 37℃, 15 min
染色条件：Glucose Uptake Probe-Green (500倍希釈) /DMEM (0 mmol/l Glucose, serum free), 37℃, 15 min
検出装置：蛍光顕微鏡
フィルターセット：GFP (Ex: 470 / 40 nm, Em: 525 / 50 nm)

プレートリーダー検出

＜検出条件＞
Ex：488 nm, Em： 520 nm

※adipocytoはウェル上に均一に作成することが困難であるため、データにバラつきが出る場合がございます。

＜実験操作＞
1. 脂肪細胞をそれぞれibidi 96-well plateに播種し一晩培養した。
2. グルコース不含培地DMEMを用いて細胞を2回洗浄し、グルコース不含培地(0 or 1 µmol/l Insulin)を添加した。
3.  37℃で15分間インキュベートした。
4.  グルコース不含培地で500倍希釈したProbe solutionを添加し、37℃で15分間インキュベートした。
5. 4℃に冷やしたWI Solution (1x)を用いて細胞を3回洗浄し、WI Solution (4℃)を添加した。
6. 蛍光顕微鏡とプレートリーダーを用いて、細胞を観察した。

実験例：前駆脂肪細胞と脂肪細胞のグルコース取り込み能力の比較

本キットを用いて前駆脂肪細胞(preadipocyte)と脂肪細胞(adipocyte)のグルコース取り込み能力の差を高感度に観察し数値化することができました。

蛍光顕微鏡観察
  
(スケールバー：50 µm)

＜測定条件＞
細胞: preadipocyte, adipocyte
使用培地：DMEM (5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS)
染色条件：Glucose Uptake Probe-Green(500倍希釈) /DMEM (0 mmol/l Glucose, serum free), 37℃, 15 min
検出装置：蛍光顕微鏡
フィルターセット：GFP (Ex: 470 / 40 nm, Em: 525 / 50 nm)

プレートリーダー検出

＜検出条件＞
Ex：488 nm, Em： 520 nm

※adipocyteはウェル上に均一に作成することが困難であるため、データに多少バラつきが出る場合がございます。

＜実験操作＞
1. 前駆脂肪細胞と脂肪細胞をそれぞれibi 96-well plateに播種し一晩培養した。
2. グルコース不含培地DMEMを用いて細胞を2回洗浄し、グルコース不含培地を添加した。
3.  37℃で15分間インキュベートした。
4.  グルコース不含培地で500倍希釈したProbe solutionを添加し、37℃で15分間インキュベートした。
5. 4℃に冷やしたWI Solution (1x)を用いて細胞を3回洗浄し、WI Solution (4℃)を添加した。
6. 蛍光顕微鏡とプレートリーダーを用いて、細胞を観察した。