ExoIsolator Exosome Isolation Kit
エクソソーム精製キット
- テクニック不要の操作性
- 超遠心法と同等の回収実績
- フィルターホルダーは再使用可能
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製品コードEX10 ExoIsolator Exosome Isolation Kit
| 容 量 | メーカー希望 小売価格 |
富士フイルム 和光純薬 |
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| 3 tests | ￥83,600 | 340-09931 |
【お知らせ】
・2024年2月1日以降に製造したEX10およびEX11には新しいIsolation Filterが同梱されます。
（新しいIsolation Filterが同梱された製品外装は「NEW FILTER」 シールが貼付されています。）
・従来のIsolation Filterと新しいIsolation Filterでは、取扱方法が異なります。
同梱されたIsolation Filterを必ずご確認の上、専用の取扱説明書および取扱動画をご利用ください。
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尚、性能は従来のフィルターと変わらないことを確認しております。
| 3 tests | ・Filter Holder ・Isolation Filter ・Tweezers |
×1 ×3 ×1 |
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性質
ExoIsolator Exosome Isolation Kit は超遠心法と同等の回収率で簡便に細胞培養上清由来のエクソソームを得ることが できるエクソソーム精製キットです。本キットは、培養上清をろ過するだけで フィルター上にエクソソームが捕集されるため、複雑な操作が必要なく、短時間でのエク ソソーム回収が可能です。回収できるエクソソームのサイズは下記をご参考ください。
(参考)
HEK293S細胞の培養上清より回収したエクソソームの粒度分布
技術情報
取扱説明書/取扱動画
同梱のIsolation Filterのラベルをご確認の上、取扱説明書および取扱動画をご参照ください。
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新しい Isolation Filter の取扱説明書
(2024年2月1日以降に製造)新しい Isolation Filter 専用動画
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従来のIsolation Filter の取扱説明書
(2024年2月1日より前に製造)従来の Isolation Filter 専用動画
特長①テクニック不要の操作性
ExoIsolator Exosome Isolation Kit はキット同梱の専用装置とフィルターを組み立て、細胞培養上清をろ過し、フィルター表面に PBS を加えエクソソーム懸濁液を回収します。回収過程におけるエクソソーム回収の損失を最小限に抑えることができ、回収操作も手技の差が出にくい操作工程です。[特許出願中]
特長②超遠心法と同等の回収実績
エクソソーム回収法で最も良く使用される超遠心法と本キットのそれぞれを用いて、HEK293S 細胞の培養上清からエクソソームを回収しました。回収したエクソソームの粒度分布 （図1）、粒子数（図2（a））とエクソソームマーカーの発現量（図2（b））をそれぞれ比較しました。結果、本キットは超遠心法と同等の粒度分布、粒子数のエクソソームを回収できており、また同タンパク質当たりのエクソソームマーカーの発現量が多いことから、本キットは超遠心法よりも純度の高いエクソソームが回収できていることが分かりました。
図１ 回収エクソソームの粒度分布
図2 粒度数(a)とエクソソームマーカーの発現量(b)
本製品のキット内容について
本キットは、フィルターホルダーとフィルターが一式入ったセット品です。フィルターホルダーはオートクレーブ滅菌することで再使用可能です。
さらに、消耗品であるIsolation Filterは10枚入りにて、別売りしております。
こちらの製品(製品コード:EX11、製品名:ExoIsolator Isolation Filter)をご参照ください。
参考文献
| 文献No. | 対象サンプル | 装置 | 引用（リンク） |
|---|---|---|---|
| 1) | 細胞培養上清 Luva Cell (ヒト肥満細胞)由来 |
蛍光顕微鏡 | Y. Wang, A. Chen, "Mast cell-derived exosomal miR-181a-5p modulated trophoblast cell viability, migration, and invasion via YY1/MMP-9 axis", J. Clin. Lab. Anal., 2022, doi:10.1002/jcla.24549. |
よくある質問
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Q
回収できるサイズを教えてください。
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A
約100-200 nmのサイズを回収できます。
(参考)
HEK293S細胞の培養上清より回収したエクソソームの粒度分布
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Q
フィルター1枚の処理可能なサンプル量を教えてください。
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A
培養上清の場合、25 mlを推奨しています。
試料の体積が増えると吸引ろ過の時間が長くなります。
例えば、HEK293S細胞の培養上清25 ml(タンパク質量11.2 μg)を用いた場合、吸引ろ過に約5-10分間を要します。
また、試料の体積だけでなく、試料に含まれるエクソソームやタンパク質の量に依存して吸引ろ過の時間が変わります。
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Q
培養上清からどのぐらいの量のエクソソームがとれますか。
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A
細胞種により分泌されるエクソソーム量が異なりますので、回収できるエクソソーム量も細胞種や培養方法により異なります。一例として、HEK293S細胞(振盪培養にて培養)の培養上清 25 ml からのエクソソームを回収した実績をご紹介します。
回収タンパク質量 (μg)
回収粒子数 (particles)
11.2 (SD±2.09)
6.0E+09 (SD±1.0E+9)
※タンパク質量はBCA法、粒子数はナノ粒子トラッキング解析にて測定しました。
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Q
ExoIsolator でのエクソソームの回収率を教えてください。
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A
サンプルによって回収率が変動する可能性がございます。
一例として、市販のウシ生乳由来エクソソームをExoIsolator で再精製して回収率を測定した実績を下記に示します。タンパク質回収率 (%) 粒子回収率 (%) 34.6 (SD±3.9) 38.3 (SD±8.3) ※タンパク質量はBCA法、粒子数はナノ粒子トラッキング解析にて測定しています。
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Q
血清含有培地で培養した細胞の培養上清からエクソソームを回収できますか。
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A
血清含有培地の使用は推奨いたしません。細胞培養で使用される血清(FBS 等)にもエクソソームが含まれているため、血清を含む細胞培養上清から回収したエクソソームには血清由来のエクソソームも含有されてしまい、実験結果に影響を及ぼす可能性が考えられます。
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Q
回収したエクソソームは保存できますか。
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A
4℃にて1ヶ月から半年間保存できます。長期間保存する場合は、-80℃で保管してください。ただし、凍結融解を極力避けるため、小分けし保存して下さい。
引用：吉岡 祐亮、落谷 孝広(2020)、エクソソーム実験ガイド ISBN: 978-4-7581-2246-7
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Q
手持ちのアスピレーターの吸引圧がわかりません。どのように確認すればよいですか？
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A
吸引圧が表示される圧力ゲージを、別途、ご準備頂くと確認できます。
ゲージをご準備できない場合は、PBSのみを吸引ろ過して、その処理時間を目安に吸引圧を調整してください。
フィルターセット後、PBS 25 mlを-25kPaの吸引圧にてろ過した場合、約30秒程度かかります。なお、エクソソームの回収率の再現性を維持するために、吸引圧のご確認をお奨めします。
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Q
エクソソームがうまく回収できません(回収率が低い)。どのような原因が考えられますか。
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A
以下の3つが原因として考えられますので、ご確認ください。
１．ろ過の際、アスピレーターの吸引圧が強すぎるとエクソソームがフィルターを通過し、回収量が著しく減少いたします。推奨の吸引圧である-25 kPa またはそれよりも弱い吸引圧でろ過を行ってください。
２．Isolation Filter には表裏があり、間違って表裏を逆転させてフィルターを使用するとエクソソームの回収率が低下します。Isolation Filer の表(光沢のある面)を上にしてご使用ください。詳細は取扱説明書および使用方法の動画をご覧ください。
３．Isolation Filter にトラップされたエクソソームを全て回収するためには、フィルター全体にPBSを万遍なくかけて回収する必要があります。こちらも、取扱説明書および使用方法の動画をご覧ください。
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Q
吸引ろ過に時間がかかります。フィルターが目詰まりします。どのような原因が考えられますか。
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A
以下の3つが原因として考えられますので、ご確認ください。
1.サンプルの量が多すぎる、またはサンプル中のタンパク質濃度が高すぎると濾過に時間がかかる場合があります。
【小社実績】HEK293S細胞上清処理時の試料体積とろ過時間
25 ml (タンパク質量11.2 μg): 5-10分
50 ml (タンパク質量22.4 μg): 30-60分
2.吸引度が低すぎるとろ過に時間がかかります。
【小社実績】HEK293S細胞上清(25 ml)処理時の吸引圧とろ過時間
吸引圧 -25 kPa: 5-10分
吸引圧 -10 kPa: 10-20分
3.エクソソーム以外の夾雑物が多く含まれると、目詰まりを起こす場合があります。
サンプルを予め0.22 μmフィルターで処理していただくことを推奨します。
取扱条件
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