バイオフィルム形成条件の検討項目としては、培地の種類、菌播種濃度、培地の交換回数、培養時間、培養温度などが挙げられます。

そのうち、培地の種類、菌播種濃度、培地の交換回数、培養時間を検討する場合の実験例をご紹介致します。
培養温度を検討される場合には、Biofilm Formation Assay Kit（製品コード：B601）を複数ご用意頂く必要がございます。
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形成量検討例-①
この検討により培地の種類、菌播種濃度、培地交換条件下でのバイオフィルム形成量を確認できます。

（プレート配置例）

日程表

手順

1)一日目：96-well plate① A, B行の各ウェルに培地A～Dで調液した菌濃度①, ②の菌液を配置例と同じように180 μl播種する。
　C～H行は空のままにする。96-peg Lidを被せ、微生物の成長に適した温度で24時間培養する。
　※例：菌濃度①約10⁷CFU/ml、菌濃度②約10⁶CFU/ml
2)二日目：96-well plate② A, B行の各ウェルに菌を含まない培地を配置例と同じように180 μl入れる。
　C, D行の各ウェルに培地A～Dで調液した菌濃度①, ②の菌液を配置例と同じように180 μl播種する。E～H行は空のままにする。
　手順1)の96-peg Lidを96-well plate②に被せ、微生物の成長に適した温度で引き続き24時間培養する。
3)三日目：96-well plate③ A～D行の各ウェルに菌を含まない培地を配置例と同じように180 μl入れる。
　E，F行の各ウェルに培地A～Dで調液した菌濃度①, ②の菌液を配置例と同じように180 μl播種する。G，H行は空のままにする。
　手順2)の96-peg Lidを96-well plate③に被せ、微生物の成長に適した温度で引き続き24時間培養する。
4)四日目：96-well plate④ A～F行の各ウェルに菌を含まない培地を配置例と同じように180 μl入れる。
　G，H行の各ウェルに培地A～Dで調液した菌濃度①, ②の菌液を配置例と同じように180 μl播種する。
　手順3)の96-peg Lidを96-well plate④に被せ、微生物の成長に適した温度で引き続き24時間培養する。
5)取扱説明書のバイオフィルム形成量・バイオフィルム形成阻害測定の手順(2)～(6)を新しい96-well plateを用いて行う。

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形成量検討例-②
この検討により培地の種類、菌播種濃度、培養時間条件下でのバイオフィルム形成量を確認できます。

（プレート配置例）

日程表

手順

1)一日目：96-well plate① A, B行の各ウェルに培地A～Dで調液した菌濃度①, ②の菌液を配置例と同じように180 μl播種する。
　C～H行は空のままにする。96-peg Lidを被せ、微生物の成長に適した温度で24時間培養する。
　※例：菌濃度①約10⁷CFU/ml、菌濃度②約10⁶CFU/ml
2)二日目：96-peg Lidを外す。96-well plate①の A, B行は培地を交換せずに培養を継続する。
　C，D行の各ウェルに培地A～Dで調液した菌濃度①, ②の菌液を配置例と同じように180 μl播種する。E～H行は空のままにする。
　外しておいた96-peg Lidを96-well plate①に被せ、微生物の成長に適した温度で引き続き24時間培養する。
3)三日目：96-peg Lidを外す。96-well plate①の A～D行は培地を交換せずに培養を継続する。 
　E, F行の各ウェルに培地A～Dで調液した菌濃度①, ②の菌液を配置例と同じように180 μl播種する。G, H行は空のままにする。
　外しておいた96-peg Lidを96-well plate①に被せ、微生物の成長に適した温度で引き続き24時間培養する。
4)四日目：96-peg Lidを外す。96-well plate①の96-well plate①の A～F行は培地を交換せずに培養を継続する。 
　G，H行の各ウェルに培地A～Dで調液した菌濃度①, ②の菌液を配置例と同じように180 μl播種する。
　外しておいた96-peg Lidを96-well plate①に被せ、微生物の成長に適した温度で引き続き24時間培養する。
5)取扱説明書のバイオフィルム形成量・バイオフィルム形成阻害測定の手順(2)～(6)を新しい96-well Plateを用いて行う。
 

小社ではBiofilm Formation Assay Kit（本製品）ならびにBiofilm Viability Assay Kit（製品コード：B603）を用いたバイオフィルムの評価において、以下の菌種での評価実績がございます。
　・Staphylococcus aureus（黄色ブドウ球菌）
　・Pseudomonas aeruginosa（緑膿菌）
　・Escherichia coli（大腸菌）
　・Streptococcus mutans（虫歯の原因菌のひとつ）
　・Porphyromonas gingivalis（歯周病の代表的な原因細菌）

上記の細菌を用いた実験例や培養条件等は、取扱説明書をご参照ください。
 

Biofilm Formation Assay Kit（製品コード：B601）を利用した場合、測定手順の最後に得られるクリスタルバイオレット(CV)溶液の吸光度として、0.5 以上(590 nm)を目安としています。