リソソームpH 検出キット Green/Deep Red

　リソソームは不要な物質を分解することで生体内恒常性の維持に寄与しています。リソソームの機能不全は神経変性疾患等の発症・進展に深く関与していることから、リソソームを詳細に解析することが病態の解明や治療薬の開発に有用であると考えられています。既存の色素を使用し機能を解析した場合、単一の色素の蛍光輝度のみで議論するため、リソソームの量が変動したのか、機能（pH）が変動したのかを判別するが困難でした。小社のLysosomal Acidic pH Detection Kit–Green/Deep Red は、リソソームpH に依存的な蛍光の変動を示すpHLys Green と、抵抗性のLysoPrime Deep Red で構成されています。これらを組み合わせてリソソーム量とpH を同時解析することで、リソソーム機能の詳細な解析が可能です。

＜原理＞

　本キットは、リソソームpH に依存的なpHLys Green と、抵抗性のLysoPrime Deep Red で構成されています。pHLys Green は、リソソーム機能の低下によってリソソームのpH が中性化すると蛍光強度が減少します。一方、LysoPrime Deep Red は、リソソームのpH 変化に抵抗性があるため、蛍光強度が変化しません。リソソームのpH に依存的もしくは抵抗性の集積性を示す2 種類の色素を組み合わせることで、リソソームpH とリソソーム量を測定し、正確なリソソームpH の変化を検出できます。

図1　リソソーム量とpH の同時測定による、リソソーム機能の詳細な解析

＜リソソームのpH 変化を正確に検出する ＞

　本キットを用いて、リソソームpH 酸性化阻害剤Bafilomycin A1（Baf. A1）を用いたリソソームの量とpH 変化の検出を行いました。LysoPrime Deep Red の蛍光は、 Baf. A1 添加にかかわらず殆ど変化しませんが、pHLys Green はBaf. A1 添加に伴うリソソーム中性化により蛍光の低下が観察されました。リソソームpH に依存的なpHLys Green と、抵抗性のLysoPrime Deep Red を組み合わせて正確なリソソーム pH変化を確認しました。また、フローサイトメトリー（ FCM）での解析も可能でした。