リソソーム pH 検出キット

　リソソームは不要な物質を分解することで生体内恒常性の維持に寄与しています。リソソームの機能不全は神経変性疾患等の発症・進展に深く関与していることから、リソソームを詳細に解析することが病態の解明や治療薬の開発に有用であると考えられています。既存の色素を使用し機能を解析した場合、単一の色素の蛍光輝度のみで議論するため、リソソームの量が変動したのか、機能（pH）が変動したのかを判別するが困難でした。小社の Lysosomal Acidic pH Detection Kit は、リソソーム pH に依存的な蛍光の変動を示す pHLys Red と、抵抗性のLysoPrime Greenで構成されています。これらを組み合わせてリソソーム pH と量を同時解析することで、リソソーム機能の詳細な解析が可能です。

＜原理＞

　本キットは、リソソーム pH に依存的な pHLys Redと、抵抗性の LysoPrime Green で構成されています。pHLys Red は、リソソーム機能の低下によってリソソームの pH が中性化すると蛍光強度が減少します。一方、LysoPrime Green は、リソソームの pH 変化に抵抗性があるため、蛍光強度が変化しません。リソソームの pH に依存的もしくは抵抗性で集積性を示す 2 種類の色素を組み合わせることで、リソソーム pH とリソソーム量を測定し、正確なリソソーム pH の変化を検出できます。

＜リソソームの pH 変化を正確に検出する＞

　本キットを用いて、リソソーム酸性阻害剤（Baf. A1）を用いたリソソームの量と pH 変化の検出を行いました。LysoPrime Green の蛍光は、Baf. A1 添加にかかわらず殆ど変化しませんが、pHLys Red は Baf. A1 添加に伴うリソソーム中性化により蛍光の低下が観察されました。リソソーム pH に依存的な pHLys Redと、抵抗性の LysoPrime Green を組み合わせて正確なリソソーム pH 変化を確認しました。

＜初めて使用される方向けのオールインワンキット＞

キットコンポーネント

• リソソーム量検出色素　LysoPrime Green
• リソソーム pH 検出色素　pHLys Red
• リソソーム pH 酸性化阻害剤　Bafilomycin A1