蛍光特性

　Calcein-AM : λ_ex=490 nm , λ_em=515 nm
　PI : λ_ex=530 nm , λ_em=620 nm

色素の最適濃度

使用するCalcein-AM及びPIの最適濃度は、細胞の種類に大きく依存しているので、使用する細胞毎に最適色素濃度を求める必要がある。以下のようにして、それぞれの細胞毎の最適濃度を求めることを薦める。
1) 目的とする細胞について、0.1%サポニン、あるいは0.1～0.5%のジギトニンで10分間処理するか、70%エタノールで30分間処理することにより死滅させる。0.1～10 μmol/LのPI 溶液にて染色し、細胞質を染めることなく核のみを赤色に染色する濃度域を探し出す。
2) 同様の死細胞を使用し、0.1～10 μmol/LのCalcein-AM溶液にて染色し、死細胞の細胞質を染色しない濃度域を探し出す。更にその濃度域で生細胞が十分染色することを、生細胞を使用して確認する。もし、染色が十分でなければ、濃度を高くして検討する。

注意事項

1) - Cellstain^®- Double Staining Kitは、-20℃以下で冷凍して保存してください。
2) 本キットには溶液の入ったマイクロチューブのコンポーネントが含まれています。チューブ内壁やキャップに溶液が付着していることがありますので、開封前に振り落としてご使用ください。
3) Calcein-AMは湿気により加水分解する恐れがあるので、使用後はキャップをしっかり閉じ、水分の吸収に注意してください。
4) 調製した染色溶液はその日のうちに使用してください。Calcein-AMが徐々に加水分解するため、バックグラウンドが上昇し観察しにくいことがあります。PI溶液は冷凍保存すれば1年以上安定です。
5) PI は発癌性の疑いがあるので下記の点を参考にして取り扱いには十分注意してください。
　1. 取り扱い時には手袋・保護眼鏡・マスク等を着用し、接触および吸引しないよう注意してください。
　2. 万一、皮膚に接触した場合は、直ちに大量の水で洗い流してください。
　3. 処理方法
使用した器具の洗浄液などの廃液は、各機関独自の取り扱いガイドラインに従い処理してください。あるいは下記処理方法を参考にして分解後廃棄してください。 
　　・UV 照射や日光にさらし分解する。
　　・次亜塩素酸ナトリウムにより酸化分解後、中和処理する。

※使用方法は、プロトコルをご覧ください。

測定方法