HilyMaxH357 取扱説明書

HilyMax (ハイリーマックス) は、新規に開発した陽イオン性合成脂質からなる遺伝子導入試薬です (特許第 4911416 号)。増殖培地中の血清の影響を殆ど受けないため、遺伝子導入時の面倒な培地交換をする必要がなく、多岐にわたる細胞種へ高効率に遺伝子導入することができます。

HilyMax Reagent	1 tube
Lipoform Buffer	1.0 ml x 1

購入後は、0 ～ 5 ℃で保存してください。
Lipoform Bufferにてリポソーム溶液を調製後は、-20 ℃で保存してください。調製後6 ヶ月間安定です。
リポソーム溶液を頻繁に使用する際は、0 ～ 5 ℃保存も可能です。0 ～ 5 ℃で、1 ヶ月間安定です。
 

凍結したHilyMaxを融解後は、必ずボルテックス又はピペッティングにより、良く混合してご使用下さい。 HilyMaxは、20回の凍結融解を繰り返しても、導入能に変化がないことを確認しております。また凍結融解の繰り返しを避けたい場合は、滅菌済みチューブへHilyMaxを小分けして、ご使用下さい。

Lipoform Buffer 1.0 ml を HilyMax Reagent の tube に添加し、ボルテックスにより30秒間撹拌し、HilyMax 溶液を調製する。
 

撹拌後は、チューブ底部のフィルム状の固体が消失したことを確認して下さい。 不溶物が残存している場合は、再度完全に溶解するまでボルテックスにより撹拌を行って下さい。

弊社ホームページにて、HilyMaxに関する情報を提供しております。是非ご覧下さい。
URL：https://www.dojindo.co.jp/products/H357/

≪掲載内容≫

遺伝子導入操作手順 24 ウェルプレート使用時 ^a)

1. 細胞の準備

2. DNA-HilyMax 複合体の調製 ^c)

 

a) 他のプレートを使用する際は『培養プレート毎条件』の項をご参照下さい。

b) 増殖培地中の血清は、遺伝子導入を妨害しません。

c) 遺伝子導入時の細胞密度により最適な DNA 量及び HilyMax 量が異なります。

d) 抗生物質を含まない無血清培地をご使用下さい。小社では DMEM、MEM、Opti-MEM での使用実績があります。

e) プラスミド DNA は、精製処理後 A₂₆₀/A₂₈₀ が 1.7 ～ 1.9 の間にあるものをご使用下さい。DNA 濃度は、0.15 ～ 1.00 mg/ml を推奨します。

f) 長時間インキュベーションすると導入効率が低下することがあります。

g) 細胞によっては、複合体添加 4 時間後に培地交換を行うことで、毒性の低下および導入効率が向上します。

DNA, HilyMax 最適量の検討：24 ウェルプレート使用時

図 1 を参考に HilyMax による最適遺伝子導入条件をご検討下さい。
細胞密度 50% 及び 80% にて評価を行い、最適な細胞密度を確認することをお勧めします。

図 1　最適条件検討用プレートレイアウト

 

24 ウェルプレート以外をご使用の際は、図 1 の DNA 量および HilyMax 添加量に表 1 の換算倍率表の値を乗じた量をご使用下さい。

表 1　プレート毎換算倍率表

96 well plate：x 0.2	12 well plate：x 2	6 well plate (35 mm dish)：x 4
60 mm dish：x 8	100 mm dish：x 24

本プロトコール中の操作方法は、24 ウェルプレート使用時の条件です。他のプレートを使用する際は、表 2 に従って導入実験を行って下さい。

 

表 2　培養容器毎での遺伝子導入条件

細胞培養条件			DNA-HilyMax 複合体調製条件
培養容器	表面積	培養液量	培地量 (無血清)	DNA 量	DNA(μg)：HilyMax(μl)
96-well	0.3 cm2	0.1 ml	10 μl	0.1-0.3 μg	1:2-1:7
24-well	1.9 cm2	0.5 ml	30 μl	0.5-1.5 μg	1:2-1:7
12-well	3.8 cm2	1.0 ml	60 μl	1.0-3.0 μg	1:2-1:7
6-well	9.2 cm2	2.0 ml	120 μl	2.0-6.0 μg	1:2-1:7
35-mm	8.0 cm2	2.0 ml	120 μl	2.0-6.0 μg	1:2-1:7
60-mm	21.0 cm2	5.0 ml	300 μl	5.0-15.0 μg	1:2-1:7
100-mm	58.0 cm2	15.0 ml	900 μl	15.0-45.0 μg	1:2-1:7

プラスミド DNA の導入率が低い時は、以下の事項をご確認下さい。

• HilyMax Reagent は、完全に溶解していますか？

⇒ HilyMax の tube 底部の半透明固体が消失しているか確認して下さい。

• 複合体調製時に、30 分以上インキュベーションをしていませんか？

⇒ 30 分以上インキュベーションすると極端に導入活性が低下する可能性があります。

• 最適な DNA 量、HilyMax 量で遺伝子導入を行いましたか？

⇒ 極端に導入効率が低い場合は、DNA(μg):HilyMax(μl)=1:5 ～ 1:9 の範囲で遺伝子導入を行って下さい。細胞毒性が強い場合は、HilyMax 量を減らして下さい。

• 遺伝子導入時の細胞密度が導入条件に合っていますか？

⇒ 使用する DNA 量、HilyMax 量により最適な細胞密度が異なります。『遺伝子導入条件の検討方法』の項を参考に最適条件をご検討下さい。