-Bacstain- AO solutionBS05 取扱説明書

-Bacstain- series は細菌用の蛍光染色試薬群です。異なる 3 つの手法 (下図) から菌の生存率を求める事ができます。

Acridine orange (AO) は環境微生物の研究分野において、存在する菌を計数するために用いられてきました。AO はdsDNA と結合して緑色の蛍光 (λ_ex=502 nm, λ_em=526 nm) を発し、ssDNA やRNA と結合した際は赤色の蛍光 (λ_ex=460 nm, λ_em=650 nm) を発します。

図1. RNAやssDNA染色のメカニズム

AO 水溶液

75 μl x 4, 濃度: 1 mg/ml

-20℃ 以下で保存して下さい。

• Flow cytometer (488 nm laser, green emisssion filter, red emission filter)
• または 蛍光顕微鏡 (blue emission filter, green emisssion filter, red emission filter)
• マイクロピペット (20 μl, 1,000 μl)

本キットには溶液の入ったマイクロチューブのコンポーネントが含まれています。チューブ内壁やキャップに溶液が付着していることがありますので、開封前に振り落としてからご使用ください。

1. 冷凍されたAO 溶液を室温にて30 分間静置し融解する。この際、遮光を行なうこと。^a)
2. 菌をPBS(-) もしくは生理食塩水に懸濁し、細胞密度を調整する。
   10⁶ cells/ml (flow cytometry) 10⁸-10⁹ cells/ml (microscopy)
3. 細胞懸濁液1 ml に対し、AO 溶液 3 μl を加え良く混合する。
4. 室温にて5 分間インキュベートする。
5. フローサイトメーターまたは蛍光顕微鏡で観察する。

a) AO は変異原性が疑われるため、操作及び廃棄には注意が必要である。

 

本マニュアルに準じた場合、約100検体分の測定が可能です。

1. J. E. Hobbie et al.,” Use of Nucleopore Filters for Counting Bacteria by Fluorescence Microscopy”, Appl. Environ. Microbiol., 1977, 1225.
2. S. F. Nishino, “ Direct Acridine Orange Counting of Bacteria Preserved with Acidified Lugol Iodine”, Appl. Environ. Microbiol., 1986, 602.

-Bacstain- CTC Rapid Staining Kit (for Flow cytometry)

-Bacstain- CTC Rapid Staining Kit (for Microscopy)

CTC は菌の呼吸活性により還元を受け、蛍光性 formazan を生成します。生菌に選択的な蛍光色素として、多く用いられ ています。
-Bacstain- CTC Rapid Staining Kit はエンハンサーの効果により、従来の CTC 染色をより迅速・高感度にできるキットです。

 

Enhancing reagent の添加によりCTC 染色能が大きく向上します。

 

-Bacstain- CFDA solution

CFDAはステラーゼ活性により蛍光を発する色素として、菌染色で広く用いられています。
-Bacstain- CFDA solution は CFDA を DMSO 溶液としていますので、調製の手間無くご使用頂けます。
CFDA はそれ自体では蛍光を持ちませんが、細胞内に存在するエステラーゼにより蛍光性のカルボキシフルオレセインと なります。

 

-Bacstain- DAPI solution

DAPI は核酸染色試薬として頻用されます。膜損傷の有・無 に関わらず細胞内に透過し、核酸を染色します。

 

-Bacstain- PI solution

PI は損傷した膜をもつ細胞にのみ透過し、核酸を染色します。

 

Products	Code	Maximum Ex/Em (nm)	Number of assays
CTC Rapid Staining Kit (for Flow cytometry)	BS01	430, 480/630	100
CTC Rapid Staining Kit (for Microscopy)	BS02	430, 480/630	100
CFDA solution	BS03	493/515	100
DAPI solution	BS04	360/460	100
AO solution	BS05	420-460/630-650 (ssDNA) 500/520 (dsDNA)	100
EB solution	BS06	520-525/615	100
PI solution	BS07	530/620	100

これらは福岡県工業技術センター生物食品研究所との共同開発製品です。