細胞用過酸化脂質検出蛍光試薬　Liperfluo

　Liperfluo は、Spy-LHP ¹⁾ の類似化合物で、過酸化脂質検出用の試薬であり、過酸化脂質で特異的に酸化されエタノール等の有機溶媒中で強い蛍光を発します（Fig. 1，2）。Liperfluo 酸化体の励起波長および蛍光波長はそれぞれ 524 nm、535 nm で、測定試料への光によるダメージや試料由来の自家蛍光の影響を軽減できます。本試薬は、ジイソキノリン環の片方にテトラエチレングリコール基が導入されたもので、Spy-LHP よりも水系バッファー中での分散性が向上しています。Liperfluo 酸化体は水中ではほとんど蛍光を発しませんが、細胞膜等の脂溶性の高い部位では蛍光性となることから、容易に蛍光顕微鏡による生細胞の過酸化脂質のイメージングやフローサイトメトリーによる細胞の過酸化脂質量の分析に使用することができます。

使用例

細胞の過酸化脂質検出

1. Liperfluo 50μg を含むチューブに DMSO 60μl を添加し、ピペッティング等を使用して溶解する
   （濃度： 1 mmol/l）。
   

   ※ ピペッティングだけでは溶解しにくいのでボルテックス、超音波、または加温にて溶解してください。
   ※ Liperfluo （DMSO）溶液調製後は、アルミホイル等で遮光し、その日のうちにご使用ください。
   

2. 操作 1 で調製した Liperfluo 溶液を細胞に添加する。
   例：細胞懸濁液（細胞数 1.0×10⁵ cells/ml） 1 ml に対して適当量の Liperfluo（DMSO）溶液を添加する。
   
   

   添加量	Liperfluo濃度
   10μl	10μmol/l
   5μl	5μmol/l
   1μl	1μmol/l

   ※培地中ではバックグラウンド蛍光が高くなる傾向にありますので、Liperfluo を添加する前に PBS 等に置換することをお勧めします。
   ※細胞懸濁液中の DMSO 濃度が 1％ 以下になるように Liperfluo 溶液を添加してください。
   

3. 37 ℃で 30 分間インキュベートする。
   
   
4. 蛍光顕微鏡あるいはフローサイトメトリー等で観察、分析する。
   

   ※ Liperfluo 酸化体は水中ではほとんど蛍光を発しませんが、バックグラウンド蛍光が高い場合は、必要に応じて PBS 等で洗浄を行ってください。

参考文献

1） N. Soh, T. Ariyoshi, T. Fukaminato, H. Nakajima, K. Nakano and T. Imato, “Swallow-tailed Perylene Derivative: a new Tool for Fluorescent Imaging of Lipid Hydroperoxides”, Org. Biomol. Chem., 2007, 5, 3762.

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