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  • 酵素(Alkaline Phosphatase)とFab'の架橋プロトコル

     

    アルカリフォスファターゼ(ALP)をSulfo-HMCSによりマレイミド化する

    1.

    ALP 2 mg(14.2 nmol)をトリス緩衝液(0.1 mol/l, pH 7)475 μlに溶解する。

    2. Sulfo-HMCS 31 mg(71 μmol)を水5 mlに溶解して加える。
    ※ Sulfo-HMCSは使用直前に溶解する。
    3. 氷浴中で1.5時間反応する。
    4. PD-10カラムで精製する。

    マレイミド化ALPとFab’(※)とつなぐ

    1.

    マレイミド化ALP (0.96 mg、192 μl )に0.1 mol/lリン酸緩衝液(5 mmol/l EDTA、pH6)で溶解したFab’抗体(0.441 mg、0.15 ml)を加える。

    2.

    16時間4℃で反応させる。

    3. 反応液をカラム精製する。
    ※ 抗体からFab’を調製する場合には、酵素処理し、F(ab’)2とした後、2-mercaptoethylamine 等で処理を行ってください。
     

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