WST-1
還元系発色試薬・細胞増殖測定用試薬
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製品コードW201 WST-1
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CAS番号150849-52-8
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化学名2-(4-Iodophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium, monosodium salt
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分子式・分子量C19H11IN5NaO8S2=651.35
| 容 量 | メーカー希望 小売価格 |
富士フイルム 和光純薬 |
|---|---|---|
| 25 mg | ￥13,200 | 342-06451 |
| 100 mg | ￥28,000 | 348-06453 |
| 500 mg | ￥89,900 | 346-06454 |
性質
現在、還元型発色試薬のMTTは生化学分野で広く利用されている。しかし、MTTから生じるホルマザンは、水に難溶な結晶として細胞表面に析出するため、吸光度測定時には、それを溶解させ均一溶液にする操作が必要になる。そこで、水溶性ホルマザンを生じるテトラゾリウム塩 WST-1は1-Methoxy PMSを電子キャリヤーとして用いると、脱水素酵素により還元され黄色ホルマザン（λmax=438 nm、ε=3.7×104）を生じる。生じたホルマザンは0.1 mol/L以上の濃度で水に溶解する。
技術情報
溶解例
10 mg/mL（水）、6.5 mg/10 mL（50 mmol/L トリスbuffer, pH8.0）
参考文献
1) M. Ishiyama, M. Shiga, K. Sakamoto, M. Mizoguchi and Pin-Gang He, "A New Sulfonated Tetrazolium Salt That produces a Highly Water-soluble Formazan Dye", Chem. Pharm. Bull., 1993, 41, 1118.
2) T. Yano, K. Teruya, S. Shirahata, J. Watanabe, K. Osada, H. Tachibana, H. Ohashi, Eun-Ho Kim and H. Murakami, "Ras Oncogene Enhances the Production of a Recombinant Protein Regulated by the Cytomegalovirus Promoter in BHK-21 Cells", Cytotechnology, 1994, 16, 167.
3) K. Teruya, T. Yano, S. Shirahata, J. Watanabe, K. Osada, H. Ohashi, H. Tachibana, Eun-Ho Kim and H. Murakami, "Ras Amplification in BHK-21 Cells Produces a Host Cell Line for Further Rapid Establishment of Recombiant Protein Hyper-producing Cell Lines", Biosci. Biotech. Biochem., 1995, 59, 341.
4) M. Ishiyama, K. Sasamoto, M. Shiga, Y. Ohkura and K. Ueno, "Novel Disulfonated Tetrazolium Salt That can be Reduced to a Water-soluble Formazan and Its Application to the Assay of Lactate Dehydrogenase", Analyst, 1995, 120, 113.
5) M. Ishiyama, H. Tominaga, M. Shiga, K. Sasamoto, Y. Ohkura, K. Ueno and M. Watanabe, "Novel Cell Proliferation and Cytotoxicity Assays Using a Tetrazolium Salt That Produces a Water-soluble Formazan Dye", In Vitro Toxicology, 1995, 8, 187.
6) S. Q. Liu, K. Saijo, T. Todoroki and T. Ohno, "Induction of Human Autologous Cytotoxic T Lymphocytes on Formalin-Fixed and Paraffin-Embedded Tumour Sections", Nature Med., 1995, 1(3), 267.
7) T. Takenouchi and E. Munekata, "Trophic Effects of Substance P and β-Amyloid Peptide on Dibutyryl Cyclic AMP-Differentiated Human Leukemic (HL-60) Cells", Life Sci., 1995, 56, 479.
8) T. Iwaki, A. Iwaki, Y. Fukumaki and J. Tateishi, "β-Crystallin in C6 Glioma Cells Supports their Survival in Elevated Extracellular K+: the Implication of a Protective Role of β-Crystallin Accumulation in Reactive Glia", Brain Res., 1995, 673, 47.
9) 渡邉正己, "細胞増殖測定法", 組織培養, 1995, 21(12), 435.
10) M. Ishiyama, H. Tominaga, M. Shiga, K. Sasamoto, Y. Ohkura and K. Ueno, "A Combined Assay of Cell Viability and vitro Cytotoxycity with a Highly Water-soluble Tetrazolium Salt, Neutral Red and Crystal Violet", Biol. Pharm. Bul., 1996, 19, 1518.
11) 溝口誠, 石山宗孝, 志賀匡宣, 佐々本一美, 臨床化学分析における新規な酸化及び還元発色試薬の開発, 分析化学, 1996, 45, 111.
12) T. Mosmann, "Rapid Colorimetric Assay for Cellular Growth and Survival: Application to Proliferation and Cytotoxicity Assays", J. Immunol. Methods, 1983, 65, 55.
13) A. H. Cory, T. C. Owen, J. A. Barltrop and J. G. Cory, "Use of an Aqueous Soluble Tetrazolium/Formazan Assay for Cell Growth Assays in Culture", Cancer Commun., 1991, 3, 207.
14) N. W. Roehm, G. H. Rodgers, S. M. Hatfield and A. L. Glasebrook, "An Improved Colorimetric Assay for Cell Proliferation and Viability Utilizing the Tetrazolium Salt XTT", J. Immunol. Methods, 1991, 142, 257.
15) 本多宏明, 小澤善徳, 森川秀行, 水村津与志, 長田嘉穂，鈴木昌治，"マイクロプレートリーダーを用いるしょうゆ中L-グルタミン酸，グルコースおよびアミノ基の定量", 醤油の研究と技術, 2005, 31(2), 63.
よくある質問
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Q
WST-1と1-Methoxy PMSを持っているので、これを使用して細胞数測定に使用したい。調整法を教えて下さい。
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A
試薬からの調整の手順は以下の通りです。
1.1-Methoxy PMSを7mg秤量し、10 mLの純水に溶解する。
----- 2 mmol/L の溶液となる。
2.WST-1を16.3 mg秤量し、4.5 mLの20 mmol/L HEPES(pH7.4)に溶解する。
3.1-Methoxy PMS水溶液0.5 mLを先のWST-1溶液に加え、全量 5 mLとする。
4.必要に応じ0.22 μmのメンブランフィルターで濾過滅菌する。＊それぞれの溶液は、冷蔵保存してください。
＊混合前であれば、溶液状態で冷蔵で半年ほど使用できます。（①と②の状態）
＊混合すると安定性が落ちますので、冷蔵保存しても3日程度しか使用できません（③の状態）
取扱条件
| 性状： | 本品は、淡黄色～黄褐色粉末で、水に溶ける。 |
|---|---|
| 水溶状： | 試験適合 |
| モル吸光係数： | 21,600 以上(244 nm付近) |
| 水分： | 6.0％ 以下 |
| 鋭敏度： | 試験適合 |
| 薄層クロマトグラフィー： | 試験適合 |
| IRスペクトル： | 試験適合 |
| NMRスペクトル： | 試験適合 |
| 保存条件: 冷蔵 |
