＊AOはフローサイトメトリーなどでは488 nm励起で観察されることもあります

Ｑ： MitoRedの使用方法を教えて下さい。
Ａ： 下記にHeLa細胞を用いた例を示します。
＊細胞の種類・観察条件等により、試薬濃度や染色条件の検討が必要となります。

＜試薬＞
　-Cellstain^®- MitoRed
　DMSO

　MitoRed 50 μg(1本分)をDMSO 78 μLで溶解する→1 mmol/L溶液

＜操作方法＞
　1.チャンバースライドに適当な細胞密度になるように細胞を培養する。
　　（1x10⁵～1x10⁶ cells/mL)
　2.培地を除き、軽く洗浄する（培地、PBS, Hank's溶液等)
　3.1 mmol/L MitoRed溶液を、培地を用いて最終濃度20～200 nmol/Lになるように希釈する。
　　（細胞に添加する前にあらかじめ37℃に保温しておいた方がよい）
　　ウェルに希釈したMitoRed溶液を加え、培養条件下で30分～1時間程度インキュベートする。
　4.MitoRed溶液を除き、培地で洗浄する。
　5．蛍光顕微鏡G励起下で観察する。
　　（λ_ex=560 nm、λ_em=580 nm)

　細胞の固定を行う場合には、(3)に続いて以下の操作を行う。
　4.MitoRed溶液を除き、洗浄する。
　　(serum freeの培地、PBS, Hank's溶液等)
　5.10 ％中性ホルマリン緩衝液で15～20 min固定する。
　6.PBSで洗浄する。
　7.蛍光顕微鏡下で観察する。

生細胞のみとなります。

死細胞ではミトコンドリアの膜電位が失われるので使用できません。