Si-DMA for Mitochondrial Singlet Oxygen Imaging
ミトコンドリア一重項酸素検出試薬
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製品コードMT05 Si-DMA for Mitochondrial Singlet Oxygen Imaging
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CAS番号1621598-01-3
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化学名N-[10-(9,10-Dimethylanthracen-2-yl)-7-(dimethylamino)-5,5-dimethyldibenzo[b,e]silin-3(5H)-ylidene]-N-methylmethanaminium, chloride
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分子式・分子量C35H37ClN2Si=549.22
| 容 量 | メーカー希望 小売価格 |
富士フイルム 和光純薬 |
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| 2 μg | ￥25,100 | 341-91911 |
性質
活性酸素種の一つであり非常に強い酸化力を持つ一重項酸素は、皮膚のシミやシワの原因となることが知られており、化粧品分野ではこの一重項酸素を消去する化合物の探索が進められている。一方、医学分野、特に癌の治療においては、光感受性物質とレーザー照射により発生した一重項酸素の酸化力により癌細胞を破壊する光線力学的治療の研究が進められており、細胞内における一重項酸素レベルをモニターできる試薬が望まれている。しかしながら既存の一重項酸素検出試薬は細胞膜を透過しない為、細胞内の一重項酸素を検出することができない。
真嶋らが開発した一重項酸素検出試薬 Si-DMAは、silicon rhodamine(SiR)骨格を蛍光団とし、一重項酸素反応部位としてアントラセンを有した構造を持つ蛍光プローブであり、このSi-DMAは、容易に細胞膜透過しミトコンドリアに集積後、選択的に一重項酸素と応答して強い蛍光を発する。このことからSi-DMAは、細胞内一重項酸素のリアルタイムイメージングが可能な蛍光色素として今後の研究への応用が期待される。
本製品は大阪大学の真嶋哲朗先生らにより開発された製品です。
| 開発元 | Dojindo Molecular Technologies, Inc. |
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技術情報
Si-DMAの細胞染色原理
Si-DMEPの励起蛍光スペクトル
Si-DMAの反応特異性
各種活性酸素種および活性窒素種への応答性を比較したところ、Si-DMAは一重項酸素に選択的に応答を示し、蛍光強度比が8倍以上増加することが確認された。
<比較条件>
PBS(pH7.4)：メタノール=1：1
Si-DMA：終濃度1 μmol/l
ROS：10 mmol/l
RNS：10 mmol/l
5-ALAで処理したHeLa細胞のSi-DMAによる一重項酸素の検出
HeLa細胞への5-aminolevulinic acid(5-ALA)処理により、ミトコンドリア内でプロトポルフィリンIXを生成。蛍光顕微鏡の励起光照射により発生した一重項酵素にSi-DMAが応答したことを確認した。
フィルター（励起波長/蛍光波長）
蛍光イメージング: 600±25 nm (Ex), 685±25 nm (Em)
ミトコンドリアにおける一重項酸素検出
| Si-DMA | MitoBright Green (ミトコンドリア染色) |
Merged | |
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HeLa細胞への刺激（過酸化水素終濃度50 μmol/L及び次亜塩素酸終濃度50 μmol/l 添加）の有無で、
細胞内に生じた一重項酸素をSi-DMAにより確認した。
またミトコンドリア染色色素（MitoBright Green※)との共染色により、ミトコンドリアにおける
一重項酸素を特異的に検出していることも確認した。
フィルター（励起波長/蛍光波長）
Si-DMA: 600±25 nm / 685±25 nm
MitoBright Green: 488 nm/ 501-563 nm
※ MitoBright Greenは現在販売しておりません。
滞留性を高めた改良品 MitoBright LT Green (製品コード：MT10)をご参照ください。
参考文献
| 文献No. | 対象サンプル | 装置 | 引用（リンク） |
|---|---|---|---|
| 1) |
細胞（HeLa; RAW264.7） |
蛍光顕微鏡 | S. Kim, T. Tachikawa, M. Fujitsuka, T. Majima, "Far-Red Fluorescence Probe for Monitoring Singlet Oxygen during Photodyanamic Therapy", J. Am. Chem. Soc., 2014, 136 (33), 11707. |
| 2) | 細胞（CT26、TK6） | フローサイトメーター | S. Bekeschus, A. Mueller, U. Gaipl, KD. Weltmann, "Physical plasma elicits immunogenic cancer cell death and mitochondrial singlet oxygen", TRPMS., 2017, 99, DOI:10.1109/TRPMS.2017.2766027. |
| 3) |
細胞（HeLa、HEK293） |
蛍光顕微鏡 | Y. D. Riani, T. Matsuda, K. Takemoto and T. Nagai, "Green monomeric photosensitizing fluorescent protein for photo-inducible protein inactivation and cell ablation ", BMC Biol, 2018, 16, 50. |
| 4) | 細胞（RIN-m5f) | 蛍光顕微鏡 | T. Guo, T. Liu, Y. Sun, X. Liu, R. Xiong, H. Li, Z. Li, Z. Zhang, Z. Tian, and Y. Tian, "Sonodynamic therapy inhibits palmitateinduced beta cell dysfunction via PINK1/ Parkin-dependent mitophagy", Cell Death Dis., 2019, 10, 457. |
| 5) | 細胞（HepG2、NIH3T3) |
蛍光顕微鏡 |
K. Murotomi, A. Umeno, S, Sugino and Y. Yoshida. , "Quantitative kinetics of intracellular singlet oxygen generation using a fluorescence probe", Sci Rep, 2020, 10, 10616. |
| 6) | 細胞（TIG-1 Cell) | 蛍光顕微鏡 | Y. Fujita, M. Iketani, M. Ito, I. Ohsawa, "Temporal changes in mitochondrial function and reactive oxygen species generation during the development of replicative senescence in human fibroblasts", 2022, doi:10.1016/j.exger.2022.111866. |
よくある質問
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Q
既存法に対する利点を教えてください。
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A
「生細胞の蛍光イメージングができること」、「一重項酸素への高い選択性」が利点です。取扱説明書に測定データを記載しています。
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Q
DMSO stock solutionは、どのくらい安定ですか？
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A
調製後、遮光下、-20℃保存で約1か月間安定です。使用量に応じて小分けして保存することをお勧めします。
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Q
Working solutionは、Hanks' HEPES以外でも調製できますか？
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A
HBSSの使用実績がございます。
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Q
Working solutionは、どのくらい安定ですか？
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A
保存できません。調整した日のうちに使用してください。
取扱条件
