性質

Bathophenanthrolinedisulfonic acid, disodium saltは鉄(II)と赤橙色キレートを形成することより、鉄の比色試薬として使用される。
　水にはよく溶け、有機溶媒には溶けない。酸解離定数はpK_a1=2.83，pK_a2=5.20である。錯生成の挙動は、Bathophenanthrolineと似ているが、水溶性なので血液など水溶性試料中の Fe^2＋の比色定量に適する（吸収極大：λ_max=535 nm，モル吸光係数：ε=2.24×10⁴，安定度定数：logβ₃=22.3）。1.0 mol/L H₂SO₄水溶液中FeL₃^2＋⇔FeL₃^3＋システム（L：Bathophenanthrolinedisulfonic acid, disodium salt）での標準酸化還元電位は1.09Vであり、赤→淡青色の変色がみられる。

応用可能な金属
Fe^2＋

比色条件
Fe^2＋（535 nm，ε=2.24×10⁴，0.25～4.0 ppm）、Cu^＋（483 nm，ε=1.23×10⁴）

応用例
血清中の鉄の定量
1) 血清 2 mLを長さ約10 cmの試験管に取り、1 mol/L HCl 1 mLを加えよく攪拌する（血清試料は0.2 mL程度でも測定することは可能である。その場合、以後の各試薬は適量に調製すること）。
2) 80～95℃の熱湯に約2分間つける。高度溶血の場合以外は冷却することなく、トリクロロ酢酸水溶液 1 mL加え、十分攪拌して蛋白凝塊を細分する。
3) 直ちに遠心分離する（2,000 rpm, 約10分間）。
4) 上澄液2 mLをとり、アスコルビン酸水溶液（0.16 g/100 mL）の10倍希釈液または塩酸ヒドロキシルアミン水溶液（4 g/100 mL）1 mLを加えよく攪拌する。
5) 本品水溶液（67 mg/100 mL）および酢酸ナトリウム水溶液（30 g/100 mL）1 mLを加えれば直ちに赤色に発色する。試薬水溶液の濃度は鉄1,000 μg/100 mLを標準にしているので、試料中の鉄の量に応じ適宜減量してよい。
6) 発色後10分～1時間の内に535 nmの吸光度測定を行う。ブランク は血清の代りに水を用いて同様に操作する。
なお、血清鉄と共に総鉄結合能および不飽和鉄結合能が、臨床診断によく用いられている。