-Bacstain- DAPI solutionBS04 取扱説明書

-Bacstain- series は細菌用の蛍光染色試薬群です。異なる 3 つの手法（下図）から菌の生存率を求める事ができます。 DAPI は DNA の AT 配列に特異的な minor grove binder です。菌染色において汎用され、膜損傷の有・無に関わらず、細 胞内へ透過し核酸を染色します。 -Bacstain- DAPI solution は溶液タイプのため、試薬調製の手間無く使用できます。

　　　　　　　　　　　　　　

DAPI 水溶液

25 μl × 4 , 濃度：1 mg/ml

0-5℃ にて保存して下さい。

• 蛍光顕微鏡 (UV exitation filter, blue emission filter)または Flow cytometer (UV exitation, blue emission filter)
• マイクロピペット (20 μl, 1,000 μl)

本キットには溶液の入ったマイクロチューブのコンポーネントが含まれています。チューブ内壁やキャップに溶液が 付着している事がありますので、開封前に振り落としてからご使用ください。

1. 冷蔵された DAPI 溶液を室温に戻すため、室温にて 30 分間静置する。この際、遮光を行なうこと。^a)
2. 菌を PBS(-) もしくは生理食塩水に懸濁し、細胞密度を調整する。1×10⁶ cells/ml (flow cytometry) 10⁸ -10⁹ cells/ml (microscopy)
3. 細胞懸濁液 1 ml に対し、DAPI 溶液 1 μl を加えよく混合する。
4. 室温にて 5 分間インキュベートする。その後、必要であればホルマリン固定 (1-4%) を行なう。
5. フローサイトメーターまたは蛍光顕微鏡で観察する。

 

a) DAPI は変異原性が疑われるため、操作及び廃棄には注意が必要である。

本マニュアルに準じた場合、約 100 検体分の測定が可能です。

DAPIを-Bacstain- CTC Rapid Staining Kitまたは-Bacstain- CFDA solutionと組み合わせる事で二重染色（呼吸活性/全菌、 エステラーゼ活性 / 全菌）が可能です。

-Bacstain- CTC Rapid Staining Kit (for Flow cytometry)

-Bacstain- CTC Rapid Staining Kit (for Microscopy)

CTC は菌の呼吸活性により還元を受け、蛍光性 formazan を生成します。生菌に選択的な蛍光色素として、多く用いられ ています。
-Bacstain- CTC Rapid Staining Kit はエンハンサーの効果により、従来の CTC 染色をより迅速・高感度にできるキットです。

 

Enhancing reagent の添加によりCTC 染色能が大きく向上します。

-Bacstain- CFDA solution

CFDAはステラーゼ活性により蛍光を発する色素として、菌染色で広く用いられています。
-Bacstain- CFDA solution は CFDA を DMSO 溶液としていますので、調製の手間無くご使用頂けます。
CFDA はそれ自体では蛍光を持ちませんが、細胞内に存在するエステラーゼにより蛍光性のカルボキシフルオレセインと なります。

 

-Bacstain- AO solution

AO は核酸染色試薬として頻用されます。膜損傷の有・無 に関わらず細胞内に透過し、核酸を染色します。

 

-Bacstain- PI solution

PI は損傷した膜をもつ細胞にのみ透過し、核酸を染色します。

 

Products	Code	Maximum Ex/Em(nm)	Number of assays
CTC Rapid Staining Kit (for Flow cytometry)	BS01	430, 480/630	100
CTC Rapid Staining Kit (for Microscopy)	BS02	430, 480/630	100
CFDA solution	BS03	493/515	100
DAPI solution	BS04	360/460	100
AO solution	BS05	420-460/630-650(ssDNA)	100
		500/520(dsDNA)
PI solution	BS07	530/620	100

これらは福岡県工業技術センター生物食品研究所との共同開発製品です。