細胞毒性測定に関するよくあるお問い合わせ

対象製品：Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST

Q. 同じ細胞を用いて、LDH アッセイ以外の評価にも使用できますか？

A.
培養上清を用いたノンホモジニアスアッセイで評価すると、残りの細胞培養液を他の評価にご使用頂けます。下記の実験フローは、培養上清を用い LDH アッセイによる死細胞の評価を、また残りの細胞を含む培地は Cell Counting Kit-8 による生細胞の評価を行ったものになります。操作手順および実験例については、下記の細胞増殖測定・細胞染色プロトコルに記載しておりますのでご参照ください。

Q. 測定に影響を与える化合物はありますか？

A.
�@培地中の血清に含まれる LDH はバックグラウンドを上昇させることがあります。
   対応 ： 無血清培地または血清量を 5％ 以下となるように調整した培地をご使用ください。

�A被検物質や培地中に強い還元性を持つ物質が含まれていると、発色色素である WST を還元し誤発色させてしまいます。
   対応 ： 細胞を含まない培地および被験物質を用いて、試薬ブランクを測定し誤発色の有無を確認してください。
      なお、一般的な DMEM、RPMI、F-12 等の培地には、通常、還元物質は含まれていません。

�B培地中にピルビン酸が高濃度含まれると LDH 活性の測定を阻害します。
   対応 ： 高コントロールの吸光度が低い（低コントロールと同程度）場合は、培地中にピルビン酸が含まれていないか
      ご確認いただき、ピルビン酸を含まない培地で評価をおこなってください。

Q. 490 nm 以外の吸収フィルターで測定できますか？

A.
小社では 490 nm を推奨していますが、数 nm 波長が異なるフィルター（例：492 nm）でも問題なくご使用頂けます。490 nm 以外では、450 nm のフィルターは小社でも使用実績があり、使用可能です。但し、吸光度は 490 nm と比較し高くなります。

Q. Working Solution 調製後は直ぐに使い切る必要はありますか？

A.
調製した Working Solution は冷蔵保存して頂ければ半年間は保存可能です。