試作品
アセチルコリンエステラーゼ特異的基質 MATP+

　アセチルコリンエステラーゼ（AChE）は、神経伝達物質であるアセチルコリンを分解して神経伝達系をコントロールする重要な酵素の一つであり、脳や血中等に存在することが知られています。この酵素は有機リン系およびカルバメート系の農薬や殺虫剤などによって活性が低下することから、これら薬物の暴露指標として用いられています。また、アルツハイマー病では神経障害によってアセチルコリン量が減少するため、AChE阻害剤がアルツハイマー病治療薬として注目されています¹⁾。

　現在、AChE活性測定には、基質であるアセチルチオコリンと検出試薬であるDTNBを用いたEllman法が一般的に用いられています^2,3)。しかしながら、アセチルチオコリンは、AChE選択性が低く、生体内に存在する非特異的コリンエステラーゼ（ブチリルコリンエステラーゼ;BChE）に対しても反応します。そのため、AChE活性を測定するためにはBChE阻害剤を添加する必要があり、操作が煩雑でした^4-6)。

　MATP+は、独立行政法人 放射線医学総合研究所（NIRS）によって開発された新規のアセチルコリンエステラーゼ（AChE）基質です⁷⁾。

　この基質は、一般的に用いられているアセチルチオコリンに比べ、非常に高いAChE選択性を有しています（Fig.1, 2）。そのため、BChE阻害剤を添加することなくAChE活性を選択的かつ簡便に測定することができます。

　本試薬は、既存のアセチルチオコリンと同様の方法によって使用することが可能です。本試薬を中性バッファーに溶解した後、AChEを含むサンプルおよびDTNBを添加し、反応に伴う412nm吸光度を測定することによってAChE活性を測定することができます。また、Karnovsky/Roots法を用いた神経組織のAChE染色にも有用です。

参考文献

1) 杉本八郎　日薬理誌, 2004, 124 , 163.

2) Vanessa Battissi et al ., Clin. Chim. Acta ., 2009, 402 , 114.

3) M. Salud Garcia-Ayllon et al ., Hepatology , 2006, 43 , 445.

4) Stephen Brimijoin and Pamela Hammond, J. Neurochemistry , 1988, 51 , 1227.

5) Franz Worek et al ., Clin. Chim. Acta , 1999, 288 , 73.

6) Ramachandra S. Naik et al ., Chem. Biol. Interact ., 2008, 175 , 298.

7) T. Kikuchi, T. Okamura, K. Fukushi, and T. Irie, Biol. Pharm. Bull ., 2010, 33 ,702.

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DTNB

　DTNBはチオール基を比色定量する試薬で、Ellman試薬と呼ばれています。DTNBはSH基が存在するとSH基の量に相当する量のS-S結合が切れて、安定な5 - Mercapto - 2 - nitrobenzoic acidを生成します。この生成したチオールの吸光度（λ_max = 412nm、ε =1 .55× 10⁴ ）からSH 基を定量します。しかもこのチオールの吸収極大波長は、DTNBの吸収（λ_max= 325 nm ）とほとんど重ならないので、未反応のDTNBが残っても測定に支障とはなりません。

　なお、亜硫酸イオン（SO₃^-）も同様の反応を起こすので、共存する場合には妨害イオンとなりますが、共存しない条件ではSO₃^-の比色試薬としても使用できます。

　DTNBの至適pHは7以上の弱アルカリ性ですが、弱酸性でのチオール基の測定には、類化合物である2-PDS、4-PDSが使用できます。

応用可能な物質　生体試料中の微量SH基の検出、比色定量

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