Q&A
Microbial Viability Assay Kit-WST

　本製品は、福岡県工業技術センターと共同開発した微生物の比色検出キットです。水溶性テトラゾリウムであるWST-8（特許2757348）を発色試薬として用いています。

＜原理＞
微生物はエネルギー代謝活動により細胞内にNAD(P)Hを生成します。 WST-8は電子メディエーターを介することで、このNAD(P)により還元され、水溶性formazan（オレンジ色）を生成します(Fig.1)。formazanの生成量は微生物のエネルギー代謝活性に比例するため、オレンジ色への呈色を見ることで、その微生物の生存率や活性度合を確認できます。 Fig.1　発色原理

＜キット内容＞ 500 tests / 1 kit（96 well プレート5枚分）
WST solution    1 ml × 5 tubes Electron mediator reagent（DMSO solution）    0.5 ml × 1 tube

Q&A

Q1.発色試薬の保存方法及び使用期限は？
A1.発色試薬溶液調製後は、冷蔵（4℃）保存で、1ヶ月以内にお 使い下さい。

Q2.酵母菌、グラム陽性菌及びグラム陰性菌も測定できますか？
A2.菌の種類にもよりますが、測定できます。

Q3.発色反応を37℃で行ってはいけませんか？
A3.微生物に最適な温度でインキュベートしていただければ、問題ありません。

Q4.菌の増殖試験を行う場合、インキュベート時間はどれくらい行えばよいでしょうか？
A4.微生物種（菌）の細胞密度により、インキュベート時間が異なります。例えば、細胞密度が1x10⁶CFU/mlで、約6時間後にコンフルエントに達する場合、2〜5.5時間の間でインキュベートすることで、菌数を確認することができます。

Q5.糸状菌での使用実績はありますか？
A5. Aspergillus 属の麹菌を使用した実績があります。

Q6.偏性嫌気性菌の測定は可能ですか？
A6.偏性嫌気性菌は、酸素に暴露することで死滅し、十分な発色が得られないため測定できません。

Q7.微生物の細胞数が同じでも、細胞そのものの活性が低い状態では、発色は低くなるのでしょうか？
A7.細胞そのものの活性が低い状態であれば、発色も弱くなります。その場合は、インキュベート時間を長くすることで検出できます。

Q8.波長450nmあるいは460nmで測定するとありますが500nmでも測定はできるのでしょうか？
A8.450〜490nmのフィルターを使用して測定下さい。500nmだと十分な感度が得られません。

Q9.1cmや0.25cmのセルを使って測定はできますか？
A9.基本的には測定は可能です。但し、96ウエルマイクロプレートと比較して、発色試薬量を多く必要としますので、実際に測定可能な検体数が減少します。

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