ペルオキシダーゼ標識用キット

Peroxidase Labeling Kit-NH2
Peroxidase Labeling Kit-SH

　これらのキットは目的とする化合物にペルオキシダーゼを標識するためのものです。1次抗体に直接ペルオキシダーゼを標識する方法は、操作が煩雑で時間もかかるものが多く、ほとんどは2次抗体にペルオキシダーゼ標識した市販品を使用し目的物の検出が行われます。

　しかし、本キットを用いることにより、目的の化合物に簡便かつ短時間でペルオキシダーゼを標識することができ、研究の発展・多様化に役立つものと考えられます。

Q1 キットが2種類ありますが、どちらを選べばよいのでしょうか？

A1 アミノ基を有する化合物内にはPeroxidase Labeling Kit-NH2を、SH基(もしくはS-S)を有するものはPeroxidase Labeling Kit-SHをご使用ください。

Q2 IgG以外のタンパク質にも標識することはできますか？

A2 アミノ基もしくはチオール基を持つタンパク質であれば標識できます。キットによる標識タンパク質の精製の都合上、分子量が50,000以上あるいは5,000以下のものが対象となります。分子量5,000以下の化合物に関しては、製品添付の‐ 低分子化合物への標識‐のプロトコールに従ってください。

Q3 使用できるIgGが少量しかありませんが標識できますか？

A3 使用できるIgGの量は50〜200 μgとしています。この範囲であれば性能に大きな違いはみられません。
　10 μgのIgGでも標識可能ですが、バックグラウンドの上昇などの問題が生じる可能性があります。

Q4 サンプルは溶液になっていても問題ないでしょうか？

A4 問題ありません。

　但し、添付のFiltration Tubeの容量に制限がありますので、サンプル溶液の容量は100 μl以下である必要があります。また、サンプル(IgGなど)の濃度が0.5 mg/ml以下である場合は、Filtration Tubeを用いてその濃度が50〜200 μgとなるようにします。
　溶液をFiltration Tubeにいれて遠心して溶液を除く操作を行ってください。（必要であれば繰り返す）
　フィルター上に残っているサンプル量が50〜200 μgとなればよいので、改めて溶解させる必要はありません。

Q5 キットの保存期間はどのくらいですか？

A5 冷蔵保存(0〜5℃)で6ヶ月（未開封時）安定であることを確認しています。

Q6 それぞれのキットでラベル化後の安定期間はどの程度ですか？

A6 添付のStorage Buffer中に保存した場合、数ヶ月は安定です。安定性は使用する抗体に依存します。

Q7 遠心が8,000×g,10 minとなっていますが、回転数がもっと少なくてもできますか？

A7 可能です。ただし、回転数を落とす場合は、時間を長くする必要があります。延長する時間はサンプルの状況をみてご判断下さい。

Q8 SHラベルのキットはS-S基を含む低分子化合物に対しても使用できますか？

A8 残念ながら、このキットではできません。S-S基をSH基に還元するためのReducing Agent と低分子化合物の分離ができないためです。還元したものを別にご用意ください。

Q9 添付の保存バッファーでなくともラベル化物の保存はできますか？

A9 可能です。実験系によりご希望のバッファーに溶解し保存してください。

Q10 免疫染色やブロッティングの例はありますか？ ない場合は、可能ですか？

A10 ウエスタンブロッティングに使用しており、使用可能であることを確認しております。免疫染色に関しては使用は可能であると思われますが、現段階ではデータはありません。

Q11 IgGに対してどれくらいのPeroxidase が標識されますか？

A11 NH2-Reactive Peroxidaseでは、IgG 1分子に対して平均1〜3分子、SH-Reactive Peroxidaseでは、還元IgG 1分子に対して平均1〜2分子です。未反応のPeroxidaseは通常のエンザイムイムアッセイには影響を及ぼしません。精製が必要な場合は、ゲルろ過カラムまたはアフィニティーカラムにより精製を行ってください。

Q12 Filtration Tube のサイズはどのくらいですか？

A12 30Kのサイズのものを使用しております。