Q1 サンプル毎の前処理法を教えて下さい。
A1 下記のような方法があります。
ー培養細胞ー
（1） 培養した細胞をPBSで2回洗浄する。接着細胞の場合は、トリプシン処理を行なった後洗浄する。
（2） PBSを除去後、細胞膜を破壊する。
例 ①－20℃で20分、室温で10分静置。これを2回繰り返す。
②超音波処理
（3） 新たにPBSを加え、良く混合する。
（4） 10000×gで15分間遠心する（冷蔵庫内で行なう）。
（5） 上清をSOD Assayする。
必要に応じて、たんぱく定量も同時に行ない、全たんぱく量に対するSOD活性を算出する。
ー赤ワイン・緑茶ー
緑 茶： 緑茶10 gに沸騰水60 mlを加え、2.5分間静置して抽出する。これをろ紙でろ過した後、更にメンブランフィルター（ポアサイズ0.45
mm） でろ過し、測定試料とする。
ワイン： 直接メンブランフィルターでろ過し、測定試料とする。緑茶や赤ワイン等はそのもの自体に着色がありますが、100倍程度に希釈すると測定に対する着色の影響は回避できます。
ー植物・野菜類ー
（例：人参、レタス、ポテト、キャベツ、トマト、カリフラワー、ほうれん草、ブロッコリ、胡椒、玉葱など）
（1） 蒸留水（野菜の重量に対し5倍量程度）で、4℃・1分間ホモジナイズする。
（2） ホモジネートをろ紙でろ過し、ろ液（水での抽出物）を凍結乾燥する。
（3） 凍結乾燥したものを、0.1 mol/l リン酸バッファー（pH
7.4）に溶かし、これを測定試料とする。溶かしたものはなるべく早く使用する。
上記測定試料により得られた活性値は、水による抽出物の凍結乾燥後の重量、もしくはホモジナイズ前の野菜の重量当たりの活性値とする。
参考文献
1) 受田浩之・森山洋憲・川名大介・片山泰幸・中林錦一・沢村正義、日本食品科学工学会誌, 49, 25 (2002).
2) 浅田浩二・中野稔・柿沼カツ子編, 「活性酸素測定マニュアル」（講談社サイエンティフィック）, p.196
3) Pietarinen-Runtti P, Lakari E, Raivio KO, Kinnula VL, Am. J. Physiol. Cell.
Physiol., 278, C118 (2000).
Q2 Mn-SODやCu,Zn-SODを分別して測れる方法はありますか？
A2 KCN添加（Cu,Zn-SOD失活）により、Mn-SODのみの活性を測定し、トータルの活性から差し引く事でCu,Zn-SODの活性が分かります。ただこれは従来から用いられている方法で、本キットでうまくいった例があるかどうかは不明です。SODの測り分けですが、以下の文献が参考になると思います。
亜硝酸法の文献に詳しい操作法が記載されています。
この方法はテトラゾリウム法にも対応できます。
（亜硝酸法での測定）
1) Y. Oyanagui, Anal. Biochem., 142, 290
(1984).
（NBT法での測定）
2) J. A. Sykes, Cancer Res., 38, 2759 (1978).
3) 谷口直之 監修，細胞工学別冊「活性酸素実験プロトコール」秀潤社,
P120.
Q3 他の活性酸素種の・OHや一重項酸素などとも反応しますか？
A3 還元物質との反応になります。・OHは酸化物質のため反応しないと考えられます。
他の活性酸素種に関しては、還元作用を示すものであれば反応する可能性はあります。
Q4 SOD Assay Kit-WSTにSODの標品はついていますか？
A4 キサンチンオキシダーゼは付いていますが、標品となるSODは別途ご購入ください（弊社での取扱いございません）。
Q5 superoxideとWSTの反応の阻害が0（発色が100％）となるところが全く発色しません。酵素(Xanthine
Oxidase)が失活しているのでしょうか？
A5 Enzyme solution（Xanthine Oxidase）は酵素の懸濁液になってますので、静置しておくと酵素が沈んでしまいます。よく振ってからご使用下さい。上澄みだけを取ってしまうとsuperoxideは全く発生しませんので発色もしません。
Q6 酵素はどのくらい安定ですか？
A6 37℃保存で1ヶ月、4℃保存だと1年以上安定であることを確認しています。
Q7 前処理等の際に界面活性剤を使うと影響はありますか？
A7 影響はあるかもしれませんが、界面活性剤の種類によっても違います。実際に使用する界面活性剤をブランクのwellに加えた場合と加え ない場合とで比較、確認して下さい。
Q8 取説に載っているプレートのレイアウトの例では、blank2は1つしかありませんが、sampleが違えばそのsample毎に必要なの でしょうか？またその場合測定できるsample数は減るのでしょうか？
A8 このKitは450 nmの吸光度で検出しますので、着色等で450
nmに吸収のあるようなsampleであれば同じsampleでも希釈倍率毎にblank2は必要になります。また、その場合は測定できるsample数は減ってきます。ただし450
nmに吸収の無いようなsampleであればそのような必要はありません。