Nitrosothiol Assay Kit

【はじめに】

　ニトロソチオール（R-SNO）は、寿命の長いNOの供給体であり、生体内では血管の弛緩等NO類似の生理活性を示すと言われています。また、EDRF（内皮細胞由来血管弛緩因子）の本質はニトロソチオールだという考えもあります。

　本キットは、ニトロソチオールのS-N結合を切断し、放出されたNOの代謝物であるNO₂^-を、Griess法で検出することでニトロソチオールを定量するキットです。元々試料中に存在するバックグランドのNO₂^-は、亜硝酸イオン消去剤により分解・消去されますので、ニトロソチオール由来のNO₂^-のみを検出することができます。

　また、現在ニトロソチオールのS-N結合の切断には水銀が最も一般的に使われていますが^1,2）、本キットは水銀を一切使用せず、環境面にも配慮しています。

【本キットの特長】

1. Hgフリーで安全です。
2. バックグランドのNO₂^-は完全に消去されるため、一回の測定でニトロソチオールのみを検出することができます。
3. 1Kitで28サンプル(n=3として)測定できます。
4. 1μmol/l以上の濃度のニトロソチオールを検出することができます。

【測定原理】

【操作方法】

1. S-Nitrosoglutathione(GSNO)を用いて検量線を作成する。
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2. 測定試料中のNO₂^-を亜硝酸イオン消去剤で消去する。
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3. 測定試料中のニトロソチオールを分解試薬で分解させてNOを放出させる。
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4. 放出されたNOが酸化されて生じるNO₂^-を Griess 試薬で発色させる。
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5. プレートリーダーで吸光度を測定し、1. で作成した検量線により試料中のニトロソチオールを定量する。

【キット内容】

1. 緩衝溶液
2. GSNO(凍結乾燥品)
3. 前処理剤
4. 亜硝酸イオン消去剤(凍結乾燥品)
5. HCl 溶液
6. Tris 溶液
7. 反応試薬A(凍結乾燥品)
8. 反応試薬B
9. Griess 試薬A
10. Griess 試薬B

【注意事項】

• 本キットは冷凍保存品です。
• 測定試料中のバックグランドのNO₂^-に対して、亜硝酸イオン　消去剤が過剰になっても測定には全く影響はありません。
• 測定試料は前処理として除蛋白が必要です。

【参考文献】

1. Robert K. Goldman, Angelo A. Vlessis, Donald D. Trunkey, Nitrosothiol Quantification in Human Plasma, Anal. Biochem., 259, 98-103(1998)
2. J. A. Cook, S. Y. Kim, D. Teague, M. Murali, C. Krishna, R. Pacelli, A. M. Miles, M. B. Grisham, D. A. Wink, Convenient Colorimetric and Flurometric Assays for S-Nitrosothiols, Anal. Biochem., 238, 150-158(1996)