鉄検出試薬の選択

鉄検出時の実験方法および測定機器に応じて試薬を選択頂けます。

確かなミトコンドリア集積性

Mito-FerroGreen のミトコンドリア内局在を確認するため、ミトコンドリア染色試薬（MitoBright Deep Red^※）と共染色を行い、Mito-FerroGreen がミトコンドリアを選択的に染色していることを確認した。

Mito-FerroGreen
励起波長：488 nm
蛍光波長：500-565 nm

MitoBright Deep Red
励起波長：640 nm
蛍光波長：656-700 nm

HeLa 細胞に 5 μmol/l Mito-FerroGreen およびミトコンドリア染色試薬 200 nmol/l MitoBright Deep Redを添加し炭酸ガスインキュベータ内で30 分間インキュベート。更に100 μmol/l 硫酸アンモニウム鉄（Ⅱ）を添加し、炭酸ガスインキュベータ内で1 時間インキュベートし、蛍光イメージングにより観察。

※ MitoBright Deep Redは現在販売しておりません。
　滞留性を高めた改良品 MitoBright LT Deep Red (製品コード：MT12)をご参照ください。

ミトコンドリア内鉄のライブイメージング

血清を含むMEM 増殖培地にて培養したHeLa 細胞へMito-FerroGreen を添加することで、ミトコンドリアに内在する鉄を蛍光にて検出した（左図）。一方、鉄を添加したHeLa 細胞では、Mito-FerroGreen の強い蛍光がみられ（中央図）、鉄キレート試薬と鉄を添加した細胞では、Mito-FerroGreen の蛍光はほどんど見られなかった。この様にミトコンドリア内鉄量の差を蛍光強度の差として確認した。

励起起波︓488 nm
蛍光波長︓500-565 nm

HeLa 細胞に5 μmol/l Mito-FerroGreen を添加し更に炭酸ガスインキュベータ内で30 分間インキュベート（左図）。その後、100 μmol/l硫酸アンモニウム鉄（II）を添加（中央図）、または、10 mmol/l DFO および100 μmol/l硫酸アンモニウム鉄（II）を添加し（右図）、それぞれを炭酸ガスインキュベータ内で1 時間インキュベートしたものを蛍光イメージングにより観察。

Fe²⁺への高い選択性

Fe²⁺への高い選択性と高いシグナルが得られる。

50 mmol/l HEPES Buffer (pH7.4) 1 ml中に1 mmol/l Mito-FerroGreen 2 μl、10 mmol/l各種金属 2 μl 及び 1 mg/ml エステラーゼ 20 μlを加え室温にて1時間反応後の蛍光強度を測定。

　励起起波：500 nm
　蛍光波長：535 nm

汎用フィルターに適応

    極大励起波長が505 nmにあるMito-FerroGreenは 488 nmでの励起が可能である。

50 mmol/l HEPES Buffer (pH7.4) 3 ml中に1 mmol/l Mito-FerroGreen 6 μl、10 mmol/l硫酸アンモニウム鉄（Ⅱ）6μl 及び 1 mg/ml エステラーゼ 20 μlを加え37℃にて1時間反応後の蛍光強度を測定。

　励起起波：505 nm
　蛍光波長：535 nm